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Terreni di coltura
Legionella
cresce molto difficilmente sui comuni terreni di coltura batterici che risultano
carenti di fattori fondamentali per la sua crescita.
- Il terreno standard per la crescita di Legionella
spp è il BCYE (Buffered Charcoal Yeast Extract), che è
costituito da CYE agar base a cui bisogna addizionare un
supplemento
contenente ferro, cisteina e α-chetoglutarato in tampone ACES (pH 6,9).
L’estratto di lievito è una fonte di nutrienti, il carbone attivo serve ad eliminare
diversi composti tossici, come i radicali dell’ossigeno, che si producono nel
terreno soprattutto dopo esposizione alla luce; il tampone assicura un pH
ottimale per la crescita di Legionella, mentre cisteina, ferro e α-chetoglutarato
ne stimolano la crescita.
- Il terreno BCYE viene utilizzato per il mantenimento dei ceppi di Legionella
in laboratorio e per l’isolamento da campioni presumibilmente sterili.
- Per l’isolamento di Legionella dall’acqua e dai campioni
clinici potenzialmente contaminati, il terreno BCYE deve essere reso
selettivo mediante l’aggiunta di supplementi a base di antibiotici, allo
scopo di inibire gli altri batteri eventualmente presenti.
- I terreni selettivi più frequentemente utilizzati sono due: MWY
(Wadowsky – Yee Medium) e GVPC. Entrambi contengono glicina,
polimixina B e vancomicina: la glicina indebolisce la parete batterica
facilitando l’azione degli antibiotici, la polimixina B inibisce la
crescita dei batteri Gram-negativi mentre la vancomicina agisce contro i
Gram-positivi.
- Il terreno MWY contiene anche anisomicina che agisce
contro i lieviti, nonché coloranti che conferiscono una colorazione
caratteristica a certe specie di Legionella.
- Il terreno GVPC è invece arricchito con cicloeximide che sopprime la
crescita dei funghi ma è fortemente tossica per contatto ed inalazione.
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